2022年8月10日 (水)
【科学実験・プレゼンテーション講座＠麻布大学（２日目）】
科学実験・プレゼンテーション講座は、２日目を迎えています。
今朝は、ひもを用いてＤＮＡの二重らせんを作成するエクササイズから始まりました。
学年も学校も違う仲間と共に過ごす本講座ですが、少しずつ慣れてきて、交流が深まった様子です。
本日は、作成したＰＣＲ溶液を用いた電気泳動実験、大腸菌にブロッコリーとＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）の遺伝子を導入する遺伝子組換え実験を行いました。
受講生の皆さん、本日の実験操作の概要を以下に示します。
振り返りの参考にしてください。
[ＰＣＲ反応液の調製の続き]
・電気泳動用サンプル作り（自分で抽出したブロッコリーのＤＮＡにローディング溶液を加える。）
・ローディング溶液にはインターカレーター（ＤＮＡに結合し、ＬＥＤ照射により蛍光を発する物質）が含まれている。
[ＰＣＲによるＤＮＡの増幅]
・ＰＣＲとはポリメラーゼ連鎖反応の略で、ＤＮＡを多量に増やすことができる。
・サーマルサイクラーという機械により温度を調節し、ＤＮＡの２本鎖をほどく、プライマーをつける、増幅させるという反応を繰り返す。
[電気泳動実験]
・電気泳動とは、電気を流しながらゲル中のＤＮＡを移動させ、ＤＮＡをその長さごとに分けることができる方法のこと。
・調製した電気泳動用サンプルをアプライする（ゲルの穴に流し込む）。
・レーン①には、定規の役割をするサイズマーカーをアプライする。
・泳動槽には、ＴＢＥ電気泳動用緩衝液（電流を流すための溶液）が入っており、pHの変化を抑えている。これにより、－に帯電するＤＮＡは電気的な力を受けて移動する。
・ゲルにＬＥＤを照射し、ＤＮＡを光らせる。結果として見えたバンドの理解は、また明日。
[遺伝子組換え実験]
・遺伝子組換えとは、本来その生物が持っていない遺伝子を人工的に組み込む操作のこと。
・大腸菌に、①１日目に自分で抽出したブロッコリーの遺伝子と、②ＧＦＰ遺伝子をそれぞれ組み込む。
・①は、ベクターＤＮＡ（大腸菌がもつ輪っか状のＤＮＡ）に水で薄めたブロッコリーの遺伝子を組み込む。それを大腸菌液と混ぜる。
・②は、ベクターＤＮＡにＧＦＰ遺伝子が組み込まれたものを大腸菌液と混ぜる。
・①・②ともに、ヒートショックによってＤＮＡが大腸菌に取り込まれる。大腸菌にＳＯＣ培地を加える。
・①はX-GAL、IPTGとともにプレートへぬる。
・②はアンピシリン（抗生物質）やアラビノースが含まれているプレート、含まれていないプレートにそれぞれぬる。
・一晩プレートを温めておき、結果はまた明日。
